3月20日，2016賽季中國足協杯賽第一輪先站8場，各支“草根球隊”捉對廝殺，勝者將挑戰中甲球隊。

3月19日，足協杯開幕式在柳州進行，這是廣西首次承辦全國大型足球賽事開幕式，是全國首個業余足球俱樂部承辦大型全國賽事開幕式。22115名觀眾涌入現場觀戰。

在上半區中，上海嘉定城發1比0寧波大榭銀博，他們將迎戰浙江毅騰。柳州遠道0比2不敵上海聚運動，之前陷入轉會風波的沈龍元出現在替補名單中，上海聚運動下一輪將迎戰新疆天山雪豹。曾留洋巴西的河北精英，意外2比3輸給了大連博陽，未來將迎戰湖南湘濤。海口海漢主場與鹽城鼎立0比0戰平，點球海漢4比2勝出，未來將迎戰深圳佳兆業。

下半區的4場比賽中，肇慶恒泰2比0戰勝蘇州中元，下輪迎戰梅州客家。蘇州東吳0比0戰平包頭南郊，點球中蘇州4比3淘汰對手，未來將對陣天津權健。有些“冷門”的是，宋黎輝執教、祝一帆、馬沖沖等中超舊將壓陣的江西聯盛，主場0比1不敵沈陽城市，后者下輪將對陣上海申鑫。而“豪門”成都錢寶隊，3比0輕取大連晟威，下一輪他們將對陣另一支大連球隊大連超越。

3月26、27日，首輪其他比賽將繼續進行。具體為：3月26日，青島鯤鵬對南京金基地產，廣州昊昕對陣沈陽東進，黑龍江火山鳴泉對陣京鐵火車頭，保定英利對陣南通支云，山西龍城至盛對陣麗江嘉云昊。3月27日，深圳人人對陣銀川賀蘭山，梅縣客家對陣北京理工，近年成績優異的武漢宏興對陣四川隆發。

勝者將與中甲球隊捉對廝殺，決出2016賽季足協杯32強。